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        1. 服務熱線

          +8610-84928167

          凍存和復蘇

          保種服務是指,通過在液氮中保存實驗動物的配子或胚胎,從而實現以較小的成本維持動物模型核心種群的方法。維通達通過凍存精子,胚胎或卵巢組織,需要時再復蘇成活體動物,確??蛻舴N質資源的安全。


          1.胚胎凍存

          胚胎凍存是安全的保存實驗動物品系的方法。影響胚胎冷凍保存成功的三個重要方面包括:①胚胎的數量;②復蘇后存活胚胎的數量;③胚胎移植后存活的成年動物數量。

          維通達建議客戶每個品系凍存約200~300枚2cell、8cell或桑囊胚時期的胚胎,每管30枚左右,即8~10管胚胎放入液氮中保存。胚胎的來源,既可以通過超數排卵的方法,或者通過體外受精(IVF)的方法獲得。當然,也可以與品系凈化結合起來,這樣可以節約獲得足量數目胚胎的準備成本。


          該技術的流程包括:

          ①胚胎采集。維通達建議凍存2-cell胚胎。若2-cell胚胎復蘇效果不佳,再考慮凍存8cell或桑囊胚時期的胚胎。

          ②胚胎清洗。我們采用國際胚胎移植協會的建議方案進行清洗,目的是防止胚胎被微生物感染。

          ③胚胎凍存。采用玻璃化冷凍進行,按照標準的流程經過凍存保護液處理后,投入液氮保存。

          ④復蘇驗證。凍存一周后,我們取出1支驗證管的胚胎進行復蘇,若胚胎存活率和囊胚發育率20~100%(野生型B6小鼠胚胎復蘇率在80%以上,不同品系間存在差異),或胚胎移植后有健康小鼠出生,表明胚胎冷凍保存成功。若2-cell復蘇存活率小于50%,我們會及時與客戶溝通,更改為8-cell或桑囊胚期胚胎凍存。

          ⑤長期保存。驗證保存成功的品系,放入專用的胚胎保存液氮罐中(一般分布于2個液氮罐),長期保存。


          2.精子凍存 

          精子凍存,在保種服務中廣泛應用,其優勢在于技術成熟,成本低,容易操作等特點。通過無菌手術分離可育雄鼠的附睪,在特定的溶液進行精子的游離,并加入專用的冷凍保護液,通過麥管冷凍保存在液氮中。

          建議客戶每個品系提供2~3只12周至4月齡的可育成年小鼠,凍存15~20支麥管的精液。

           

          3.品系恢復

          在基因修飾動物模型的使用過程中,由于各種原因造成該品系的繁育出現障礙,如由于老齡化造成精子活力的降低,或由于疾病或意外造成繁育期動物生命垂危,這時可以通過維通達提供胚胎復蘇、精子復蘇,或者輔助生殖技術進行動物品系的恢復。

          (1)胚胎復蘇

          凍存的胚胎按照標準程序復蘇后,移植到代孕大小鼠的輸卵管或子宮內,得到活體后代的過程。

          (2)精子復蘇

          體外受精是指將成熟的卵子和獲能的精子在體外進行受精的過程。維通達有豐富的作體外受精的經驗,建議精子活力大于30%時,直接采用體外受精方法復蘇后代。

          (3)輔助透明帶切開體外受精

          輔助透明帶切開是指獲得的精子活力小于30%時,精子不能順利穿過透明帶,采用傳統的方法不能得到受精卵時,對卵母細胞的透明帶進行打孔或切開,從而獲得受精卵的方法。維通達可以采用Xyclone激光破膜儀進行透明帶打孔,或者用專用的尖針將透明帶切開,兩種方法均可得到較高的受精率。



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