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          HBV小鼠

          1. 基本信息

          品系名稱:B6-Tg (HBV)5 Vst /Vst

          常用名C57BL/6-HBV; HBV 轉基因小鼠

          背景C57BL/6NCrl

          毛色黑色


          品系建立

          將1.28倍長度的HBV(A型,GenBank: AF305422.1) 線性化片段注入C57BL/6NCrl小鼠胚胎原核,獲得轉基因陽性小鼠。通過外周血HBV拷貝數分析,保留了拷貝數達到108 IU/ml的首建鼠。按照半合子配野生C57BL/6NCrl小鼠的方式建立了HBV轉基因小鼠品系。


          2. 表型分析

          (1)外周血中人乙肝e抗原,乙肝表面抗原和外周血HBV病毒拷貝數分析表明,雌鼠和雄鼠均有較高水平的表達。

          性別

          數量

          平均值

          體重(g)

          HBeAg(COI)

          HBSAg(COI)

          HBV-DNA(IU/ml)

          70

          17.99

          495.21

          5.80E+04

          5.25E+07

          70

          22.13

          846.61

          1.29E+05

          6.77E+07



          HBV DNA數據散點圖(平均值為5.25E+07)

           5dca2434f29d9.png        

          圖1  5~8周齡HBV小鼠外周血中HBV病毒拷貝數分析。



          ②HBeAg(COI) 數據散點圖(平均值為495.21)

          5dca24484e391.png

          圖2  5~8周齡HBV小鼠外周血中e抗原HBeAg(COI)分析。


          (2)不同月齡HBV小鼠肝臟、脾臟大體觀(Chin Hepatol, 2018, 23(1): 26-30)

          5dca2454474dc.png

          圖3 不同月齡HBV小鼠肝臟、脾臟大體觀。



          (3)不同月齡HBV小鼠肝體比、脾體比,差異不顯著(Chin Hepatol, 2018, 23(1): 26-30)

          5dca246984d19.png

          圖4 不同月齡HBV小鼠肝體比、脾體比。



          (4)采用HBV Tg小鼠和CCL4誘導結合,可以成功建立乙肝肝纖維化小鼠復合模型(參見Acta Lab Anim Sci Sin,2019,27(5))。

                5dca247d70994.png

          圖5  6種小鼠模型肝組織病理HE、天狼猩紅染色與膠原半定量分析。A. 肝組織病理HE、天狼猩紅染色;B. 膠原染色半定量分析;**P < 0.01 vs WT,▲▲P < 0.01 vs rAAV+CCl4,n = 5。(參見Acta Lab Anim Sci Sin,2019,27(5))。


          研究數據表明HBV Tg 小鼠在聯合CCl4 染毒12 周后能夠穩定成模。合理地選用小鼠慢性乙肝模型可以有效解決HBV 在病毒感染、復制、免疫應答和藥物評價方面的難題。



          3. 應用領域

          高水平表達HBV病毒的小鼠模型,為研究病毒和宿主因素影響HBV復制、發病基因和生理學過程提供了部分可能性;為控制HBV復制研究,提供了穩定可遺傳的小動物模型。

          該模型可用于研究HBV、治療藥物和疫苗及更下游的慢性肝炎和纖維化(結合化學誘導)。



          4. 注意事項

          (1)因為B6背景雄鼠大于6周齡后極容易發生咬架打斗情況,為避免意外發生,建議單只單籠飼養和實驗。若實驗空間緊張,建議選擇雌鼠進行實驗。

          (2)根據衛生部文件《人間傳染的病原微生物名錄》,HBV屬于第三類病毒,需要在ABSL-2(BSL-2)設施進行實驗。

          (3)為了確保安全,建議接種HBV疫苗后,HBV抗體陽性的人員,才能接觸該動物進行實驗和實驗。

          (4)實驗小鼠、排泄物、墊料和相關設施,按照ABSL-2(BSL-2)要求進行處理。



          5. 參考文獻

          (1)LG Guidotti, B Matzke, HSchaller and F V Chisari. J. Virol. 1995, 69(10):6158.

          (2)J. Ren, L.Wang, Z. Chen, et al. Journal of Medical Virology 78:551–560 (2006).

          (3)黃愷, 孫鑫, 趙志敏,等. 兩種乙肝肝纖維化小鼠復合模型的比較[J]. 中國實驗動物學報,2019,27(5).Huang K,Sun X,Zhao ZM, et al. Comparison of two composite mouse models of hepatitis B fibrosis. Acta Lab Anim Sci Sin,2019,27(5).

          (4)孫鑫,黃愷,趙志敏,等. C57BL/6N-Tg(1.28HBV)/Vst 乙肝病毒轉基因小鼠肝臟炎癥與纖維化的病理特點. 肝臟,2018, 23(1): 26-30. Sun X,Huang K,Zhao ZM, et al. Pathological features of liver inflammation and fibrosis in hepatitis B virus transgenic mice C57BL/6N -Tg(1.28HBV) /Vst [J]. Chin Hepatol, 2018, 23(1): 26-30.



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